是否有現貨：	是	認證：	飛凈 Phygene
級別：	超純、高純	用途：	實驗室
含量：	標準品	應用：	科學研究
型號：	PH0317	規格：	100ml
商標：	飛凈 Phygene	包裝：	瓶
產量：	3565

產品簡介：

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)，其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統的細胞組織快速裂解液，對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有裂解作用。根據其裂解液的強度不同，大致可以分為強、中、弱三類。

本品屬于裂解強度居中的RIPA裂解液，含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、IP等實驗。
使用說明:

(一) 細胞樣品

1）融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

2）貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液清洗細胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入μl 裂解液的比例加入裂解液。用*吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。

懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成5×105～1×106個細胞/管，然后再裂解。

3）充分裂解后，g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200μl或250μl。

（二）組織樣品：

1）把組織剪切成細小的碎片。

2）融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

3）按照每20mg組織加入μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

4）用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5）充分裂解后，g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6）如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。

【注】：RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正?，F象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。
注意事項:

1）需自備PMSF。

2）裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

3） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

*Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

我們所提供的產品僅供科研使用，不得用于臨床診斷、治療、食品或者化妝品等用途！