是否有現貨：	是	認證：	飛凈 phygene
級別：	超純、高純	用途：	實驗室
含量：	標準品	應用：	科學研究
型號：	pH0406	規格：	100ml
商標：	飛凈 phygene	包裝：	瓶
產量：	2326

產品簡介：

Western及IP細胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本細胞裂解液裂解的細胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。

Western及IP細胞裂解液的主要成分為20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑?？梢杂行б种频鞍椎慕到?，并維持原有的蛋白間相互作用。用Western及IP細胞裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
使用說明:
對于培養細胞樣品：

1. 融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

2.?對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入微升裂解液的比例加入裂解液。用*吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。

3.?對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成萬細胞/管，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。

4. 充分裂解后，g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。

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對于組織樣品：

1. 把組織剪切成細小的碎片。

2. 融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

3. 按照每20毫克組織加入微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注意事項:
1）為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融?？梢赃m當分裝后使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

2）關于裂解液的選擇，一方面可以參考我們生產的各種裂解液主要特點、差異，選擇合適的裂解液；另一方面也需要通過一些預實驗來摸索最佳的適合您實驗條件的裂解液。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

*Important Note:?This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

我們所提供的產品僅供科研使用，不得用于臨床診斷、治療、食品或者化妝品等用途！